眼刺激試驗(yàn)是化妝品安全評(píng)價(jià)的主要測(cè)試項(xiàng)目，化妝品引起的局部眼刺激通常包括結(jié)膜、角 膜、虹膜和淚腺的作用， 基于體內(nèi)眼刺激作用發(fā)生的機(jī)制，目前已開發(fā)了多種替代方法。因此，廣曼根據(jù)角膜損傷的發(fā)生機(jī)制，結(jié)合體外方法的原理和標(biāo)準(zhǔn)化應(yīng)用程度，根據(jù)客戶不同需求，為客戶提供最專業(yè)的眼刺激試驗(yàn)方案。
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
測(cè)試受試物引起雞胚絨毛尿囊膜毒性變化的能力，從而客觀評(píng)估物質(zhì)潛在的眼刺激性程度。
2.實(shí)驗(yàn)原理
雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)是一種較早被采用的眼刺激性體外評(píng)估方法，是利用雞胚絨毛膜尿囊膜結(jié)構(gòu)與人結(jié)膜相似的特點(diǎn)開發(fā)的替代方法。絨毛尿囊膜（CAM）是一個(gè)呼吸性膜，包圍在雞胚周圍。本試驗(yàn)利用孵化的雞胚中期絨毛尿囊膜血管系統(tǒng)完整、清晰和透明的特點(diǎn)，將受試物直接接觸CAM膜，于5 min之后觀察絨毛尿囊膜毒性效應(yīng)指標(biāo)（主要為：出血、凝血 和血管融解）的變化，這些指標(biāo)反映血管及血管網(wǎng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)、顏色和通透性的變化，以及反映絨毛尿囊膜蛋白質(zhì)變性等現(xiàn)象及其受損程度，然后組合得到一個(gè)評(píng)分，用于評(píng)估受試物的眼刺激性。
3.評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)
表 8-4 HET-CAM 評(píng)分表
| 分值 |
0分 |
1分 |
2分 |
3分 |
| 出血 |
無(wú)出血 |
輕度出血：僅見細(xì)小血管出血和少量出血（如0.5% TexaponASV，作用5min） |
中度出血：小血管和大血管出血，并有明顯的血液流出（如1.0% TexaponASV，作用5min） |
重度出血：幾乎所有血管都出血，大量血液流出（如5% TexaponASV，作用5min） |
| 凝血 |
無(wú)凝血 |
輕度凝血：血管內(nèi) 和/或 血管外輕度凝血，和/或 CAM膜輕度混濁（輕度凝血如0.2% NaOH 溶液作用 5min，輕度混濁如0.3% 乙酸作用5min） |
中度凝血：血管內(nèi) 和/或 血管外中度凝血，和/或 CAM膜中度混濁（中度凝血如0.3% NaOH 溶液作用5min，中度混濁如3% 乙酸作用5min） |
重度凝血：血管內(nèi) 和/或 血管外重度凝血，和/或 CAM膜重度混濁（重度凝血如0.5% NaOH 溶液作用5min，重度混濁如30% 乙酸作用5min） |
| 血管融解 |
無(wú)血管融解 |
輕度血管融解：僅小血管融解（如0.5% TexaponASV，作用5min） |
中度血管融解：小血管和大血管融解（如 1% TexaponASV，作用5min） |
重度血管融解：大血管和全部血束都融解（如 5% TexaponASV，作用5min） |
4.評(píng)分附圖
5.刺激性評(píng)價(jià)
表1. 刺激評(píng)分結(jié)果評(píng)價(jià)
| 刺激評(píng)分IS |
預(yù)測(cè)分類 Prediction classification |
| IS＜1 |
無(wú)刺激性 Non-irritant（NI） |
| 1≤IS＜5 |
輕度無(wú)刺激性Slightly irritant（SI） |
| 5≤IS＜9 |
中度無(wú)刺激性 Moderately irritant（MI） |
| IS≥10 |
強(qiáng)刺激性/腐蝕性 Strong irritant/Corrosive（Co） |
終點(diǎn)評(píng)分法（ES）：每只雞胚記分=每只雞胚觀察到的出血、凝血和血管融解程度的和；
終點(diǎn)評(píng)分（ES）=6 只雞胚得分的數(shù)總和。
表2.終點(diǎn)評(píng)分法結(jié)果評(píng)價(jià)
| 刺激性分類 |
無(wú)/輕刺激性 |
中度刺激性 |
強(qiáng)度刺激/腐蝕性 |
| 終點(diǎn)評(píng)分 |
ES≤12 |
12＜ES＜16 |
ES≥16 |
二：絨毛膜尿囊膜血管試驗(yàn)(chorioallantoic membrane vascular assay．CAMVA)
是簡(jiǎn)化了的 HET-CAM方法，只觀察受試物暴露CAM 30 min后血管的變化(出血、血管溶解和凝血)，計(jì)算使50％ 的雞胚出現(xiàn)上述損傷的受試物濃度。CAMVA法適 用于輕度到中度眼刺激性化合物的檢測(cè)，也可正確區(qū)分刺激物和非刺激物。
