一、實驗?zāi)康?/div>
模擬化妝品生產(chǎn)、儲存和消費者使用過程中可能存在的微生物污染（一次污染和二次污染），人為的在產(chǎn)品中加入定量的已知菌種，定期跟蹤檢測產(chǎn)品中微生物的消長情況，來評判防腐劑的防腐效果的實驗，從而最大程度保證化妝品中中微生物含量達標。
《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015 版的微生物指標
| 微生物指標 |
限值 |
備注 |
| 菌落總數(shù)（CFU/g 或 CFU/mL） |
≤500 |
眼部化妝品、口唇化妝品和兒童化妝品 |
| ≤1000 |
其他化妝品 |
| 霉菌和酵母菌總數(shù)（CFU/g 或 CFU/mL） |
≤100 |
- |
| 耐熱大腸桿菌/g（或 mL） |
不得檢出 |
- |
| 金黃色葡萄球菌/g（或 mL） |
不得檢出 |
- |
| 銅綠假單胞菌/g（或 mL） |
不得檢出 |
- |
二、菌種選擇
同微生物限度實驗。
三、實驗方法
-
方法1一次加菌法
稱取一定量的受試樣品，按1:x的比例加入混合菌懸液，要求樣品中的細菌初始加菌濃度達到105*106 cfu/g；酵母和霉菌初始加菌濃度達到105*106 cfu/g以及不同濃度梯度抑菌劑。將樣品與菌液充分混合均勻，用封口膠封好樣品瓶口，置于25℃的培養(yǎng)箱中保存。在接菌后的第7、14、21和28天取樣檢測微生物含量。
-
方法2 三次加菌法
稱取一定量的受試樣品，按1：x的比例加入混合菌懸液，要求樣品中的細菌初始加菌濃度達到106*107 cfu/g ；酵母和霉菌初始加菌濃度達到105*106 cfu/g 。將樣品與菌液充分混合均勻后，用封口膠封好樣品瓶口，置于25℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接下來每14天加菌一次一共加3次菌，每次加菌濃度均需達到要求。從第一次加菌后的每七天取樣做微生物含量檢測，即采樣分析第7、14、21、28、35、42天中樣品的含菌量。其中，第14天檢測后進行第二次加菌，第28天檢測后進行第三次加菌。
四、評價標準
CTFA標準
美國化妝品、洗滌劑和香精協(xié)會（CTFA)推薦的菌種，是極具代表性的，按CTFA標準做微生物挑戰(zhàn)試驗通過，全世界公認3年保質(zhì)期。
| 第一次加菌 |
細菌 |
細菌：7天內(nèi)細菌的數(shù)量降低99.9%以上，14天內(nèi)細菌的數(shù)量< 10，28天時未檢出。 |
| 霉菌和酵母菌 |
霉菌和酵母菌總數(shù)培養(yǎng)7天時數(shù)量減少90%，不再增加，通過測試。 |
| 第三次加菌 |
防腐效果優(yōu)良 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天時，存活菌量減少99.9%，通過測試。 |
| 防腐效果尚可 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天時，存活菌量減少90%以上，通過測試。 |
| 防腐效果差 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天時，存活菌量減少低于起始濃度的90%,不通過測試。 |
五、參考標準
到目前為止, 世界各國及其有關(guān)組織對化妝品防腐體系的評價還未有一個統(tǒng)一的方法, 但其基本設(shè)計則是相同的,其中美國藥典( USP)法及美國化妝品、香精和洗滌劑協(xié)會( CTFA) 法是較具代表性的兩種方法。
我司參考標準：
美國藥典USP 39（51）
美國化妝品、香精和洗滌劑協(xié)會( CTFA)
歐標EP 7.0-5.1.3
